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EMSA實(shí)驗(yàn)
更新時(shí)間：2023-10-30
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EMSA實(shí)驗(yàn)
EMSA：凝膠遷移或電泳遷移率檢測(cè)是一種檢測(cè)蛋白質(zhì)和DNA序列相結(jié)合的技術(shù)，初用于研究DNA結(jié)合蛋白和其相關(guān)的DNA結(jié)合序列相互作用，可用于定性和定量分析。分為2種類型：同位素標(biāo)記探針，非同位素標(biāo)記探針。
通常將純化的蛋白和細(xì)胞粗提液和32P同位素標(biāo)記的DNA或RNA探針一同保溫，在非變性的聚丙烯凝膠電泳上，分離復(fù)合物和非結(jié)合的探針。DNA-復(fù)合物或RNA-復(fù)合物比非結(jié)合的探針移動(dòng)得慢。同位素標(biāo)記的探針依研究的結(jié)合蛋白的不同，可是雙鏈或者是單鏈。當(dāng)檢測(cè)如轉(zhuǎn)錄調(diào)控因子一類的DNA結(jié)合蛋白，可用純化蛋白，部分純化蛋白，或核細(xì)胞抽提液。在檢測(cè)RNA結(jié)合蛋白時(shí)，依據(jù)目的RNA結(jié)合蛋白的位置，可用純化或部分純化的蛋白，也可用核或胞質(zhì)細(xì)胞抽提液。競(jìng)爭(zhēng)實(shí)驗(yàn)中采用含蛋白結(jié)合序列的DNA或RNA的片段和寡核苷酸片段（特異），和其它非相關(guān)的片段（非特異），來(lái)確定DNA或RNA結(jié)合蛋白的特異性。在競(jìng)爭(zhēng)的特異和非特異片段的存在下，依據(jù)復(fù)合物的特點(diǎn)和強(qiáng)度來(lái)確定特異結(jié)合。
EMSA實(shí)驗(yàn) 實(shí)驗(yàn)步驟：探針的標(biāo)記，探針的純化，EMSA膠的配制，EMSA的結(jié)合反應(yīng)，探針冷競(jìng)爭(zhēng)反應(yīng)，突變探針冷競(jìng)爭(zhēng)，super-shift 反應(yīng)，電泳。
服務(wù)內(nèi)容：包含電子版掃膜結(jié)果及灰度值分析，每張膜可做1-7個(gè)樣本。
